多克隆抗體與單克隆抗體的區別
發布時間:2023-08-20 12:29:43 點擊:1852
多克隆抗體和單克隆抗體的關鍵差異及各自的優缺點。
小結
多克隆抗體 | 單克隆抗體 |
制備成本低廉 | 制備成本高昂 |
制備技能要求不高 | 應用技術之前需接受專門培訓 |
制備速度較快 | 需要較長的時間制備雜交瘤細胞 |
產生大量非特異性抗體 | 產生大量特異性抗體 |
識別任一抗原上的多個表位 | 僅識別一個抗原上的單一表位 |
批次間可能存在差異 | 制得的雜交瘤細胞為持續且可再生產的單克隆抗體來源 |
- | 批次間無差異或差異較小 |
多克隆抗體
特點:
識別任一抗原上的多個表位。所得血清為異質性抗體混合物,其親和力各有不同。
多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。
通常使用多肽免疫原制備以獨有表位為靶標的多克隆抗體,尤其是針對高同源性的蛋白家族。
抗體制備:
制備成本低廉且制備速度較快。
制備過程比單克隆抗體簡單。
優點:
多克隆抗體可識別任一抗原上的多個表位,因此具有以下優點:
高親和性:由于靶蛋白上的多個表位能夠結合不止一個抗體分子,多克隆抗體可放大低表達水平靶蛋白的信號。但是,這會影響定量實驗(如流式細胞術實驗)結果的準確性。
可識別多個表位,有利于免疫沉淀 (IP) 和染色質免疫沉淀 (ChIP) 實驗獲得更好的結果。
與單克隆抗體相比,對微小抗原變化(例如多態性、糖基化異質性或者輕微變性)的包容性更強。
可識別與免疫原蛋白質具有高度同源性的蛋白質,還可用于篩查非免疫原物種的靶蛋白。
通常是檢測變性蛋白質的首選。
多表位通??商嵘龣z測的穩定性。
缺點:
易產生批次間差異。
產生大量非特異性抗體,可能會在某些應用中產生背景信號。
由于具有多個表位,檢測免疫原序列的交叉反應性非常重要。
不適用于探測抗原的特定結構域,因為抗血清通常會識別多個結構域。
單克隆抗體
特點:
不易產生批次間差異。
僅由一種抗體亞型組成(例如 IgG1、IgG2、IgG3)。如需使用二抗進行檢測,應針對正確的亞類選擇抗體。
抗體制備:
技術要求較高。
應用技術之前需接受專門培訓。
需要花費較長時間制備雜交瘤細胞。
優點:
制得的雜交瘤細胞為持續且可再生產的單克隆抗體來源,而且所有批次均相同,有助于提升實驗過程和實驗結果的一致性和標準化水平。
單克隆抗體只檢測每個抗原上的一個表位,因此具有以下優點:
切片和細胞染色產生的背景信號更少。特異性地檢測一個靶表位,不易與其它蛋白質發生交叉反應。
由于具有高特異性,單克隆抗體非常適于用作實驗中的一抗,其產生的背景染色信號通常顯著低于多克隆抗體。
相較于多克隆抗體,單克隆抗體的同質性非常高。在相同的實驗條件下,單克隆抗體實驗之間的結果重現性非常高。
得益于其高特異性,單克隆抗體能夠在相關分子的混合物中(例如在親和純化過程中)極為高效地結合抗原。
缺點:
特異性過高,以致于無法進行跨物種的檢測。
與多克隆抗體相比,更易受化學處理造成的抗原表位丟失的影響。這可通過合并靶抗原相同的兩種或多種單克隆抗體進行補償(例如使用抗體組合試劑盒)。